人参三七川芎提取物对自然衰老大鼠血管外膜重构的干预机制

摘要：目的 观察自然衰老大鼠血管外膜的重构特点,并探讨人参三七川芎提取物的干预作用.方法 将85只20月龄的自然衰老Wistar大鼠按体重水平分层后随机分为衰老组、人参三七川芎醇提物低、中、高剂量组(下称中药低、中、高剂量组)及氯沙坦对照组(Losartan组),每组1 7只,另选14只2月龄青年Wistar大鼠作为青年组.中药高、中、低剂量组分别给予不同剂量的人参三七川芎醇提物[1 493.4、746.7、373.4 mg/(kg·d)]灌胃给药,Losartan组给予氯沙坦钾混悬液[10 mg/(kg·d)]灌胃,衰老组及青年组给予同体积蒸馏水灌胃,均每日1次.干预15周后,采用HE染色法观察各组大鼠胸主动脉壁形态;采用苦味酸天狼猩红染色法观测血管壁胶原种类、分布和含量;放射免疫分析法检测血浆肾素活性(plasma renin activity,PRA)、血浆血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)浓度及外膜组织AngⅡ含量;生物化学分析法检测外膜组织羟脯氨酸水平;实时荧光定量多聚酶链式反应(real-time PCR,RT-PCR)检测外膜组织血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡreceptor 1,AT1 R)、血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensin Ⅱreceptor 2,AT2 R)mRNA水平;Western blot法检测外膜组织AT1R、AT2R蛋白表达水平.结果 与青年组比较,衰老组血管外膜增厚,外膜厚度/管径增高,胶原纤维堆积,Ⅰ型胶原面积增加,Ⅲ型胶原面积减少,Ⅲ型胶原/Ⅰ型胶原降低(P＜0.05),血浆PRA及AngⅡ降低(P ＜0.01,P＜0.05),外膜组织AngⅡ及羟脯氨酸含量增高,AT1R mRNA及蛋白表达下调,AT2 R mRNA及蛋白表达上调(P ＜0.01,P＜0.05).与衰老组比较,中药低、中、高剂量组均可改善衰老血管形态学改变;中药中、高剂量组及Losartan组外膜厚度/管径均减小,中药高剂量组及Losartan组Ⅰ型胶原面积减少,Ⅲ型胶原面积增加,Ⅲ型胶原/Ⅰ型胶原明显升高,血管外膜羟脯氨酸含量明显降低(P ＜0.05,P＜0.01);中药中、高剂量及Losartan组外膜组织中AngⅡ水平降低(P ＜0.01,P＜0.05);衰老组、中药各剂量组、Losartan组各组间PRA比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与衰老组比较,各治疗组AT1R mRNA表达均增加(P＜0.01),中药中、高剂量组AT2R mRNA表达亦增加(P＜0.05);中药高剂量组及Losartan组AT1 R蛋白表达升高(P ＜0.01,P＜0.05);中药中、高剂量组AT2R蛋白表达亦升高(P＜0.05).结论 衰老大鼠血管出现外膜重构,表现为外膜增厚,胶原堆积,Ⅰ型、Ⅲ型胶原比例紊乱等,其机制可能与局部肾素血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)激活有关;人参三七川芎提取物可能通过对外膜局部AngⅡ、AT1R等多靶位的干预,改善外膜重构,进而延缓血管衰老.